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PCR反应液被污染应对方法
日期：2025-04-30 04:56
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摘要：
PCR反应液被污染应对方法：
1. DNase I 法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。
2. 内切酶法：选择识别4个碱基的内切酶（如MspI和TaqI等），可同时选择几种，以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷，室温作用1h后加热灭活进行PCR。
3. 紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射，注意事项与方法同上述UV照射法。
4. 尿嘧啶...
PCR反应液被污染应对方法：
1. DNase I 法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。
2. 内切酶法：选择识别4个碱基的内切酶（如MspI和TaqI等），可同时选择几种，以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷，室温作用1h后加热灭活进行PCR。
3. 紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射，注意事项与方法同上述UV照射法。
4. 尿嘧啶糖苷酶（UNG）法：用dUTP代替dTTP，使PCR产物中掺入大量dU。在再次进行PCR扩增前，用UNG处理PCR混合液即可消除PCR产物的残留污染。由于UNG在PCR循环中的变性一步便可被灭活，因此不会影响含dU的新的PCR产物。
总之，灵敏度越高的PCR反应越容易出现PCR污染。采用适当的措施消除污染，可以避免重复实验和浪费试剂，也使得实验结果更加可靠而精准。