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如何解决PCR反应低效率或抑制作用？
日期：2025-04-28 21:49
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摘要：
解决PCR反应低效率或抑制作用？
一旦确定反应被抑制或效率较低，则可采取一些步骤将效率值重新调整到理想范围内。
1、对于抑制作用，可去除模板浓度zui高的反应孔并重新分析标准曲线。如果效率重新回到110% 以下，则分析良好。
2、另一种解决方案是重新纯化模板。切记应延长干燥时间，以去除乙醇沉淀过程中的乙醇，或采用另外的柱上洗涤液将离液盐从硅胶纯化物中去除。
3、通过分析优化可解决效率低下的问题。此过程有时相对简单，但在某些情况下，随着分析...
解决PCR反应低效率或抑制作用？
一旦确定反应被抑制或效率较低，则可采取一些步骤将效率值重新调整到理想范围内。
1、对于抑制作用，可去除模板浓度zui高的反应孔并重新分析标准曲线。如果效率重新回到110% 以下，则分析良好。
2、另一种解决方案是重新纯化模板。切记应延长干燥时间，以去除乙醇沉淀过程中的乙醇，或采用另外的柱上洗涤液将离液盐从硅胶纯化物中去除。
3、通过分析优化可解决效率低下的问题。此过程有时相对简单，但在某些情况下，随着分析复杂度的提高，优化过程可能十分耗时费力。
4、扩增单个产物时，将镁的浓度提升至6mM 可提高反应效率，但当出现竞争作用时，则应降低镁的浓度。
5、在某些情况下(主要是多重反应中)，必须采用引物和探针优化基质。此时，需检测正向引物与反向引物的比值或浓度，有时甚至还需检测探针比值，以找出分析的理想浓度组合。zui佳引物浓度介于100至600nM之间，而zui佳探针浓度则在100nM至400nM 之间。