减少或消除PCR反应中的引物二聚体方法

如果出现了引物二聚体，有许多方法可以减少或消除反应中的引物二聚体。

1、 首先是优化热循环条件，这主要是提高退火温度。大多数情况下，两步循环 (由 95°C 变性步骤直接进入60°C 退火和延伸步骤) 有利于强效扩增，因此引物设计时设定的成功退火温度为 60°C。

2、可降低引物浓度，甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的帮助。大多数情况下，每条引物的理想终浓度为 200 nM，但如有需要，可将浓度降至 60 nM。

3、镁的合适浓度一般约为 3 mM。高于此浓度易形成引物二聚体。

4、如果未对引物形成二聚体的倾向进行评估，则应补充评估并考虑重新设计 (如有需要)。通常情况下，好使用热启动 DNA 聚合酶，并在冰上进行反应。

5、在理论上，针对同一靶点应同时检测多个引物组。这实际上可以节省大量时间，因为如果这些引物中的一个能立即发挥作用，则可以减少花费在优化过。

大鼠骨成型蛋白受体1Aelisa试剂盒图片检测中样品的处理

1．细胞培养物上清：细胞培养物于室温1000g，离心10分钟后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。

2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g，4℃离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃,1000g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

4．尿液：无菌收集取初尿，离心除去沉淀物，即可用于检测，要长期保存尿样，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿样冰冻保护液放入-20℃冰箱长期保存。

5．组织匀浆：将组织标本先用PBS洗涤，除去多余血液，匀浆化后放在PBS于-20℃放置过夜，再经过二次反复冻融破膜，5000g，4℃离心5分钟，取上清即可检测。注：取样和样品处理过程中，防止有毒物质对操作人员的危害，要采取相应的保护措施。