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PCR反应出现非特异性扩增原因及对策
日期：2025-04-30 08:06
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摘要：PCR反应出现非特异性扩增原因及对策
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。
1、 引物与靶序列不完全互补或引物聚合形成二聚体。
2、 Mg2+离子浓度过高。
3、 退火温度过低。
4、 PCR循环次数 过多有关。
5、 酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：必要时重新设计引 物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次 数。适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性，65℃左右退火与延伸）。